肺癌患者为什么要做基因检测？如何进行基因检测？结合2022年中国临床肿瘤学会（CSCO）指南[2]和非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南（2021 版）[3]的相关推荐，小编带您一探究竟！
肺癌患者为什么要进行基因检测？
近十年来，NSCLC的治疗，尤其是耙向治疗，取得了极大的进展，可明显提高患者治疗的客观缓解率（ORR），延长患者的无进展生存期（PFS），并显著提高患者的生活质量（QoL）。而分子分型是NSCLC实施靶向治疗的前提[3]。
研究数据表明，我国肺腺癌患者的常见驱动基因包括表皮生长因子受体（EGFR，45%~ 55%）、KRAS（8%~10%）、间变性淋巴瘤激酶（ALK，5%~10%）、少见驱动基因包括ROS1（2%~3%）、 MET（2%~4%） 、HER2（2%~4%）、BRAF（1%~2%）、RET（1%~4%）、罕见驱动基因包括NTRK（<1%）、NRG1/2（<1%）、FGFR2（<1%）等；与西方人群存在较大差异[3]。因此，选择准确、快速、恰当的检测方法，全面筛选出适用靶向药物的目标人群具有重要临床意义。此外，随着少见基因变异的不断发现以及靶向药物获得性耐药机制的完善，基因检测有助于肺癌患者耐药后的治疗选择[3]。
那么，基因检测适用于哪些肺癌患者？
肺癌基因检测适用人群、检测时机和检测靶点
-
肺癌基因检测的适用人群[2]：
2022 CSCO指南推荐可手术的Ⅰ~Ⅲ期NSCLC患者和不可手术的Ⅲ~Ⅳ期NSCLC患者进行基因检测。
-
肺癌基因检测的检测时机和检测靶点[2]：
对于可手术的Ⅰ~Ⅲ期NSCLC患者，2022 CSCO指南推荐术后Ⅱ/Ⅲ期非鳞癌进行EGFR突变检测，以指导辅助靶向治疗（Ⅰ级推荐）。
对于不可手术的Ⅲ~Ⅳ期NSCLC患者，2022 CSCO指南推荐靶向治疗前或治疗过程中进行基因检测：
-
病理学诊断后保留足够组织标本进行分子检测，根据分子分型指导治疗（1类）：对于非鳞癌组织标本进行EGFR突变，ALK融合、ROS1、RET融合及MET14外显子跳跃突变检测（3类）（Ⅰ级推荐）；
-
BRAF V600E突变、KRAS突变、ERBB2（HER2）扩增/突变，MET扩增以及NTRK融合等基因变异可通过单基因检测技术或二代测序技术（NGS）在肿瘤组织中进行，若组织标本不可及，可考虑利用游离/肿瘤DNA（cf/ctDNA进）行检测（2B类）（Ⅱ级推荐）；
-
肿瘤标本无法获取或量少不能行基因检测时，可通过外周血cf/ctDNA进行EGFR突变检测（Ⅰ级推荐）；
-
不吸烟、经小标本活检诊断鳞癌或混合腺癌成分的患者建议EGFR突变、ALK融合及ROSI融合等检测（2A类）（Ⅱ级推荐）；
-
一/二代EGFR-TKIs耐药患者，建议再次活检进行EGFR T790M检测。不能获取肿瘤标本的患者，建议行cf/ctDNA进 EGFR T790M检测（Ⅰ级推荐）。
肺癌基因检测方法包括哪些？需要注意什么？咱们接着往下看！
肺癌基因检测的方法和注意事项
NSCLC常见的分子病理检测方法包括Sanger测序、荧光原位杂交（FISH）、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、免疫组化（IHC）、NGS等，上述检测方法在EGFR、ALK、ROS1等靶点的临床检测中发挥着重要作用[3]。
-
EGFR靶点的检测方法和注意事项[3]：
目前EGFR基因突变检测的方法有很多种，临床常用的检测方法包括 Sanger测序法、qRT-PCR法和NGS等。但需要注意的是：
-
对于传统方法检测的驱动基因阴性晚期肺腺癌患者，推荐进行NGS检测。
-
对于一、二代EGFR-TKI耐药患者，优先推荐进行T790M检测（qRT-PCR或NGS）。也可同时与其他耐药机制进行检测或T790M检测阴性后用NGS进行其他耐药机制的检测。三代TKI耐药患者，推荐进行NGS检测耐药机制。
-
ALK靶点的检测方法和注意事项[3]：
由ALK基因重排所导致的ALK融合基因表达可以在多个分子水平上进行检测，包括：FISH在DNA水平上检测ALK基因重排；qRT-PCR检测ALK融合mRNA；IHC检测ALK融合蛋白表达，以及NGS检测DNA水平上的重排序列或mRNA水平上的融合序列。但需要注意的是：
-
在进行IHC-Ventana D5F3、FISH、qRT-PCR及NGS检测结果判读时，对于检测结果不能确定、信号不典型或者位于临界值的患者，应建议使用其他技术平台进行检测。
-
优先应用IHC- Ventana D5F3进行ALK检测。当怀疑检测标本有质量问题时，优先应用FISH检测。当和其他基因（如EGFR、ROS1等）一起检测时，可以进行qRT-PCR或NGS检测。
-
ROS1靶点的检测方法和注意事项[3]：
基于qRT-PCR方法的ROS1融合基因检测具有较高的灵敏度和特异度，且可与ALK联检；FISH检测是检测ROS1重排的“金标准”；NGS检测ROS1基因变异同样可在DNA水平上检测重排序列，也可在mRNA水平检测融合序列。但需要注意的是：
-
IHC检测ROS1蛋白表达用于初筛ROS1融合临床应用前，实验室应经过严格的检测流程、判读标准、质量控制和保证，阳性病例需经过其他技术平台进行验证。
-
在进行FISH、qRT-PCR及NGS检测结果判读时，对于检测结果不能确定、信号不典型或者位于临界值的患者，应建议使用其他技术平台进行检测。
-
当和其他基因（如EGFR、ALK等）一起检测时，可以进行qRT-PCR或NGS检测。
-
MET靶点的检测方法和注意事项[3]：
MET 14号外显子跳跃突变的检测包括NGS或qRT-PCR直接检测缺失MET 14号外显子的mRNA，或NGS在DNA水平上检测可能导致MET 14号外显子剪切的基因变异。但需要注意的是：
-
在临床实践中，MET 14号外显子跳跃突变的检测，可与其他驱动基因变异同时检测，或对其他驱动基因变异阴性的患者进行单独检测。
-
应根据可及的检测平台、标本质量及标本类型，合理选择不同的检测方法。
-
可参考其他融合基因检测策略。当组织标本不可及时，血浆标本也可以考虑用于MET 14号外显子跳跃突变的检测，作为补充。
-
其他靶点的检测方法和注意事项[3]：
HER2、BRAF、KRAS、RET、NTRK等的检测方法可参照基因点突变 、基因重排类型的检测方法和检测策略，当仍需进一步积累临床实践经验。
综上所述，NSCLC患者在治疗前或治疗过程中都应进行基因检测，以指导治疗决策。NSCLC常见的分子病理检测方法包括Sanger测序、FISH、qRT-PCR、IHC、NGS等，但所有分子病理检测方法均具有优缺点，也受所检基因变异类型和数量、标本类型、标本数量和质量、实验室条件等影响，医生会根据实际情况选择适合患者的分子病理检测方法，进而根据检测结果指导患者接受相应的靶向药物治疗。
参考文献：
[1]. Li T, et al. J Clin Oncol. 2013 Mar 10;31(8):1039-49.
[2].中国临床肿瘤学会（CSCO）非小细胞肺癌诊疗指南.2022版.
[3].非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南(2021版)[J]. 中华病理学杂志,2021,04:323-332.
